為了能夠實現蛋白的大規模生產，我們通常會選擇通過構建穩定細胞株的方式來實現。當然了，穩定細胞株構建的過程相對來說復雜，而且中間會因為很多原因造成構建失敗。有鑒于此，普健生物專業為大家盤點一下有關穩定細胞株構建過程中的常見問題。

　　1、是否需要進行密碼子優化

　　因為密碼子種類多樣、數量差異等問題，所以，密碼子優化對穩定細胞株的構建有著很大的作用，能夠大幅度提高目標蛋白的表達量;

　　2、如何選擇合適的啟動子

　　對于大部分的啟動子來說，使用得當都能在大多數細胞中獲得高表達性。CMV、EF1A、CAG、CBh、SFFV等都屬于強啟動子，可以作為穩定細胞株的啟動子;

　　3、穩定細胞系培養體系

　　構建穩定細胞系時一般建議使用版抗性篩選濃度來維持細胞生長，可添加葡萄糖來調節細胞代謝水平，維持細胞增殖;

　　4、標簽是放N端還是C端

　　這個需要結合實際情況來選擇，如果信號肽在N端，則將標簽放在C端;蛋白較小也放C端，純化中需要酶切標簽則推薦放N端;

　　5、是否需要構建穩轉敲除的細胞系

　　一般來說，我們不建議敲除元件穩定持續的表達在細胞中，因為這個操作會在很大程度上影響細胞的狀態;

　　穩定細胞株構建一般使用在蛋白大規模生產時，在構建過程中需要注意的問題也不止如上幾樣，各個方面的細節操作也需要引起注意，而且需要有相應的技術支持。普健生物專業為廣大用戶提供穩定細胞株構建服務，如果您有相關需求，歡迎來電咨詢。