在進行穩定細胞株構建時,為了將目的蛋白基因載入到宿主細胞中,我們都會選擇通過轉染的方式來實現。可以說,轉染的成功與否,直接關系到目的蛋白表達的結果。那么,我們在進行穩定細胞株細胞轉染時,有沒有什么辦法提升其轉染效率,起到事半功倍的效果呢?今天,普健生物就和大家具體聊聊。
我們知道,常用的細胞轉染方法主要有三種,分別是生物轉染、物理轉染以及化學轉染。
生物轉染:其實就是通過病毒感染的方式,將目標蛋白DNA整合到宿主細胞中去;
物理轉染:通過電穿孔、細胞注射等方法,直接將目的蛋白DNA注入到宿主細胞中去(不過容易造成細胞死亡);
化學轉染:利用陽離子與陰離子核酸結合的特性,使得兩者相互吸引,從而實現轉染;
從上面的描述我們不難看出,對于不同的轉染方法,其有著不同的優勢和劣勢,其轉染效率主要和如下幾個方面有關:
1、細胞活力。轉染成功率和細胞活性有著極大的關系,自然是活力越強,轉染的成功率就越高,而且和細胞類型也有著一定的關系;
2、細胞融合度。融合度越高,能夠在一定程度上提升細胞轉染的接受程度;
3、核酸類型。簡單核酸類型轉染成功率更高,反之越是復雜,成功率相對月低;
4、轉染方法。對于不同類型的細胞選擇不同類型的轉染方法其成功率存在著極大的不同;
所以,想要提升穩定細胞株細胞轉染的目的,我們可以從如下幾個方面入手:
1、選擇活性高的細胞。盡量選擇那些細胞活性高的細胞,避免選擇活性低的細胞;
2、提升核酸純度。細胞轉染時需要保證目的DNA與RNA盡可能同質,確保每個步驟不收RNA酶的影響;
3、合適的細胞密度。需要控制好細胞密度,過高或過低都會造成轉染效率變低;
4、選擇合適的轉染方法。根據細胞的類型選擇合適的轉染方法,不要一直使用單個轉染方法;
總的來說,我們在穩定細胞株細胞轉染時,需要結合細胞類型及其細胞活性來進行方法選擇,在轉染過程中需要注意到各類細節問題,只有這樣,才能更好地保證實驗的成功。武漢普健生物專業為廣大用戶提供穩定細胞株構建服務,如果您有相關需求,歡迎來電咨詢。

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