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客戶背景
在水產養殖領域，魚類疾病防控是全球性難題，疫苗和佐劑的研究備受關注。近期發表在《Fish and Shellfish Immunology》的一篇研究（DOI: 10.1016/j.fsi.2025.110415）展示了草魚補體C5a C端肽（C5a-CP）作為疫苗佐劑的卓越潛力。這項研究由華中農業大學和珠江水產研究所聯合完成，揭示了C5a-CP在增強草魚IgM?B細胞吞噬活性和提高疫苗免疫效果方面的關鍵作用，為魚類疫苗佐劑的開發提供了重要理論基礎。
客戶需求
研究中需要表達草魚IgM重鏈恒定區（IgM-CH）并制備抗C5aR的多克隆抗體（pAbs），以驗證C5a-CP的免疫調節機制。
技術難點
1. 蛋白表達與純化：草魚IgM-CH等魚類蛋白因其特殊結構和序列特性，在異源表達系統中（如大腸桿菌）易發生錯誤折疊或低表達量，需優化表達條件和純化流程。
2. 抗體特異性：抗C5aR抗體的制備需針對特定抗原表位（如C5aR N端肽）設計，確保抗體能特異性結合目標蛋白，同時避免非特異性信號干擾。
3. 功能驗證：重組蛋白和抗體需在復雜的生物學實驗（如吞噬實驗、Ca²?動員檢測）中保持生物活性，需嚴格的質量控制。
技術服務方案
我們提供一站式蛋白表達與抗體定制服務，助力草魚C5a-CP研究：
1. 重組IgM-CH表達與純化：
（1）腸桿菌系統中表達GST標簽IgM-CH（GenBank: DQ417927.1），通過IPTG誘導及梯度尿素透析復性，確保蛋白純度>95%及ELISA檢測活性。
（2）采用親和層析結合BCA法定量，保證蛋白符合標準曲線構建需求（0.015625-0.25 μmol/L）。
2. 抗C5aR pAbs定制與驗證：
（1）針對C5aR N端肽（DYGPFDFSNESYSC）設計抗原，制備兔源pAbs，通過免疫熒光和流式細胞術驗證特異性，確保C5aR?細胞準確標記。
（2）交付周期4-6周，滿足項目進度。
3. 功能驗證支持：
（1）提供ELISA檢測IgM-CH活性，流式細胞術驗證抗C5aR pAbs在IgM? B細胞中的特異性。
（2）支持Ca²?動員（Fluo4-AM）和吞噬實驗（熒光微珠），確保C5a-CP功能驗證可靠。
我們的蛋白表達和抗體定制技術可確保IgM-CH蛋白和抗C5aR抗體的穩定供應，支持其在疫苗佐劑開發中的關鍵驗證。研究結果表明，C5a-CP顯著提高草魚對Aeromonas hydrophila和GCRV-II的免疫保護率（RPS達96.03%），為魚類疫苗佐劑開發開辟新路徑。
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