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采用雜交瘤細胞技術制備單克隆抗體的具體步驟及原理

發表時間:2024-06-14 訪問次數:1518

  雜交瘤細胞技術是最常用于制備單克隆抗體的方式,通過將骨髓瘤細胞與免疫后的B淋巴細胞相融合而形成的細胞。融合形成的這個細胞既可以避免B細胞無法無限增殖的缺點,又可以大量制備所需抗體。也正因為這個特性,使得其在臨床試驗中得到了廣泛的應用。那么,雜交瘤細胞技術的操作流程是怎樣的呢?

雜交瘤細胞技術

  1、免疫小鼠。通過抗原提取或定制,得到純度較高的抗原,而后將其注入到小鼠體內。當然了,為了免疫成功,間隔一段時間后再次對小鼠進行免疫,多輪免疫后,確保免疫成功;

  2、細胞提取。當小鼠免疫成功后,提取出脾臟,并將其分離出來;

  3、細胞融合。將小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞進行融合,形成雜交瘤細胞;

  4、細胞篩選。將雜交瘤細胞放入培養基中,通過相關技術手段,篩選出合適的雜交瘤細胞;

  5、細胞擴增。將篩選出的雜交瘤細胞進行擴增,并收集齊上清液;

  6、蛋白純化。通過親和層析等技術,對所得單克隆抗體進行純化;

  7、蛋白鑒定。通過一些手段對單克隆抗體進行特異性、親和力等方面特性的鑒定;

  當然了,隨著相關技術的不斷發展,各種單克隆抗體制備的技術營運而生,如Single B兔單克隆抗體制備等技術。但是,其在技術需求方面有著一定的要求,需要結合實際情況來選擇。

  大規模單克隆抗體制備的流程是怎樣的?

  對于大規模單克隆抗體制備來說,在主要流程上大體相同,但是在一些細節方面有著一定的不同。

  1、免疫小鼠。將抗原注入小鼠體內,使得其產生免疫反應;

  2、淋巴細胞分離。提取免疫成功后的小鼠脾細胞;

  3、細胞融合。將脾細胞與骨髓瘤細胞進行融合;

  4、抗體篩選與鑒定。將雜交瘤細胞篩選和鑒定;

  5、抗體生產。對雜交瘤細胞進行擴增,大規模培養,而后實現抗體的大規模生產;

  相對其他抗體制備方式來說,雜交瘤細胞技術無論是在制備技術要求上還是制備成本上都有著極大的優勢,適用于大部分抗體制備的情況。當然了,雜交瘤技術也有著一定的局限性,比如操作步驟繁瑣、抗體鼠源性等,但是,相信隨著技術的不斷發展,這些問題將會得到解決。更多有關雜交瘤技術的相關知識,敬請關注普健生物。

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