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雜交瘤技術制備抗體的相關原理和詳細步驟

發表時間:2024-02-20 訪問次數:1345

  在單克隆抗體制備的方法中,雜交瘤技術的使用是非常頻繁的。雜交瘤技術是在體細胞融合技術上發展起來的一種技術,它通過將免疫動物細胞的脾細胞與骨髓瘤細胞相融合,所得細胞不僅能夠實現體外連續傳代,更是能持續性制備抗體。

雜交瘤細胞單克隆抗體制備

  雜交瘤技術的原理:

  雜交瘤技術的基本原理是通過將兩種細胞融合,讓融合所得的細胞能夠同時擁有兩者的特征。而我們常說的雜交瘤抗體制備技術是通過將經過免疫的小鼠脾細胞和骨髓瘤細胞,所得細胞既具備抗體分泌功能,更是能夠實現體外連續培養,具備所謂的永久性。

  雜交瘤技術的步驟:

  1、選擇合適的細胞并進行融合

  我們知道,脾臟是B細胞聚集的重要場所,也就是說,只要我們對機體進行刺激,在脾臟內都會出現明顯的抗體應答。所以,我們可以通過在脾臟中提取免疫應答后的B細胞,并將其與骨髓瘤細胞相融合,而后加入細胞融合劑促使兩種細胞相融合;

  2、選擇合適的培養基

  細胞的融合是一個隨機的過程,融合后的細胞可能是脾細胞與脾細胞、脾細胞與B細胞、B細胞與B細胞、未融合的脾細胞、未融合的B細胞以及細胞的多聚體等。結合細胞融合所需的營養選擇合適的培養基,通過5-7天的培養后,多聚體和未融合的細胞會自動篩除。而后,我們再將融合后的雜交瘤細胞篩選出來即可;

  3、細胞篩選及稀釋

  細胞的篩選主要分為兩步來進行,第一步是融合細胞的篩選,將成功融合的細胞從混合物種篩選出來。第二步是特異性篩選,將能夠產生我們所需抗體的細胞進行特異性篩選;

  而后,將篩選出來的融合細胞進行充分稀釋,并分配到培養板上,保證每個空中至少有數個細胞(這一過程也被稱為克隆化)。而后,在將這些陽細胞進行再次克隆化,然后再利用其特異性篩選出合適的細胞。而后對所得細胞進行增殖、凍存;

  雜交瘤細胞技術作為單克隆抗體制備的重要手段,所得抗體無論在質量還是數量上都有著極大的優勢。雖然說隨著技術的不斷發展,各種全新的技術也應運而生,但是雜交瘤細胞技術依然是現階段使用非常廣泛的方式之一,而且隨著技術的不斷完善,相信未來的使用會變得更加的廣泛。武漢普健生物專業為廣大用戶提供單克隆抗體制備服務,如果您有相關需求,歡迎來電咨詢。

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